dr witczak endokrynolog zielona góra

Po 2 tygodniach hodowli komórki utrwalono, a następnie wybarwiono przeciwciałem monoklonalnym 23c6, które identyfikuje OCL. Wyniki są wyrażone jako średnie. SD dla trzech kultur z typowego eksperymentu. Podobny wzór wyników zaobserwowano w 10 niezależnych eksperymentach. (b) Ekspresja mRNA 24-hydroksylazy w prekursorach OCL. Każdy typ transdukowanej komórki był traktowany 10. LM do 10. 8 M 1,25- (OH) 2D3 i samymi pożywkami przez 3 dni. Całkowity RNA ekstrahowano z komórek i poddawano odwrotnej transkrypcji stosując losowe startery. Ciała z pierwszej nici cDNA zostały przesłane do analizy PCR dla 24-hydroksylazy za pomocą specyficznych primerów. PCR przeprowadzono przez 35 cykli. Produkty PCR rozdzielono przez elektroforezę na 2% żelu agarozowym, a produkt 348 bp ujawniono barwieniem bromkiem etydyny w świetle ultrafioletowym. Podobne wyniki wykryto w 2 niezależnych eksperymentach. Aby potwierdzić, że zwiększona wrażliwość transdukowanych komórek MVNP na 1,25- (OH) 2D3 była wewnętrzną właściwością komórek, a druga, w której pośredniczył receptor witaminy D, ekspresja mRNA 24-hydroksylazy w odpowiedzi na 1, W transdukowanych komórkach mierzono 25- (OH) 2D3. Kiedy 1,25- (OH) 2D3 wiąże receptor witaminy D, 24-hydroksylaza jest pierwszym indukowanym enzymem (16). Ekspresję mRNA 24-hydroksylazy indukowano w komórkach transdukowanych MVNP w stężeniach 1,25- (OH) 2D3, które były co najmniej log mniejsze niż wymagane do jego ekspresji w komórkach transdukowanych MVM (Figura 3b) i transdukowanych EV komórki (dane nie pokazane). Ekspresja RANK i sekrecja IL-6 przez komórki jednojądrzaste stransfekowane MVNP i MVM. Aby pomóc w określeniu mechanizmu odpowiedzialnego za zwiększone tworzenie OCL przez komórki transdukowane MVNP, zbadaliśmy ekspresję RANK i IL-6 przez transdukowane komórki MVNP. RANK jest wyrażany na zaangażowanych prekursorach OCL i ma kluczowe znaczenie dla tworzenia OCL (17,18). Co więcej, IL-6 jest wyrażana na wysokich poziomach przez grupowe OCL, ale nie przez normalne OCL, i może działać jako czynnik autokrynny w celu zwiększenia tworzenia OCL u pacjentów z chorobą Pageta. (19). IL-6 zwiększa również proliferację wczesnych prekursorów OCL (20). Całkowity RNA wyizolowany z transdukowanych komórek MVNP, MVM i EV analizowano za pomocą RT-PCR stosując startery swoiste dla RANK. MRNA RANK wykryto w transdukowanych komórkach MVNP pod nieobecność 1,25 (OH) 2D3 po 2 dniach hodowli (Figura 4a). Przeciwnie, komórki transdukowane MVM wymagały leczenia 1,25- (OH) 2D3 w celu wywołania ekspresji RANK po 2 dniach hodowli (Figura 4a). Zgodnie z oczekiwaniem mRNA RANK wykryto we wszystkich komórkach po 7 dniach hodowli z 1,25 (OH) 2D3 (dane nie przedstawione). W 3 niezależnych eksperymentach stosunek mRNA RANK w transdukowanych komórkach MVNP do mRNA RANK w komórkach transdukowanych MVM wynosił 6,4. 0,6. Traktowanie transdukowanych komórek MVNP 1,25 (OH) 2D3 zwiększało ekspresję mRNA RANK tylko 1,6. 0,3-krotnie w porównaniu z nietraktowanymi komórkami. Przeciwnie, traktowanie komórek transdukowanych MVM 1,25 (OH) 2D3 zwiększyło ekspresję mRNA RANK 7,3. 0,6-krotnie w porównaniu z nietraktowanymi komórkami. Stosunek ekspresji mRNA RANK w komórkach transdukowanych MVNP- i MVM potraktowanych 1,25- (OH) 2D3 był podobny (1,4. 0,3-krotnie). Poziomy ekspresji mRNA RANK w transdukowanych komórkach EV były na granicy wykrywalności densytometru. Figura 4 Ekspresja mRNA RANK i aktywacja NF-kB przez ligand RANK. (a) Całkowity RNA wyekstrahowano z każdego rodzaju stransdukowanej komórki, a następnie pozostawiono nietraktowane lub traktowano 10. 8 M 1,25- (OH) 2D3 przez 2 dni. RNA poddano odwrotnej transkrypcji losowymi starterami. CDNA pierwszej nici zostały poddane analizie PCR dla RANK przy użyciu specyficznych starterów. PCR przeprowadzono przez 35 cykli. Produkty PCR rozdzielono przez elektroforezę na 2% żelach agarozowych i ujawniono przez barwienie bromkiem etydyny w świetle ultrafioletowym
[więcej w: ashwagandha skutki uboczne, badanie trus, wodniak powrózka nasiennego ]