Ekspresja Bcl-x w prekursorach erytroidalnych od pacjentów z czerwienicą prawdziwą ad 5

W dniu 7 kolonie przeniesiono do hodowli płynnej z erytropoetyną lub bez niej i inkubowano przez dodatkowe 24 godziny. Kontrolne progenitory erytrocytów nie wykazywały wzrostu bez dodatku erytropoetyny i nie znaleziono kolonii w hodowlach metylocelulozy. W przeciwieństwie do tego, kolonie erytroidalne powstały z komórek progenitorowych od pacjentów z czerwienicą prawdziwą hodowanych w nieobecności erytropoetyny (Figura 3B). Reprezentatywna analiza cytometrii przepływowej tej erytropoetycznej populacji niezależnej od erytropoetyny wykazała, że większość komórek A z dodatnią glikoforyną wyrażała Bcl-x (61,3%, w porównaniu z 9,7%, które były ujemne dla Bcl-x) (Figura 3A). Wynik ten został potwierdzony przez barwienie immunocytochemiczne, które wykazały zwiększoną ekspresję Bcl-x w bardziej dojrzałych komórkach erytroidalnych (Figura 3C). Figura 4. Figura 4. Ekspresja RNA Bcl-x Messenger w koloniach erytroidów od pacjenta z czerwienicą prawdziwą (PV) i podmiotem kontrolnym. Całkowity RNA poddano analizie reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkryptazą za pomocą starterów oligonukleotydowych, które amplifikują zarówno Bcl-xL, jak i Bcl-xS. Jednoczesną amplifikację dwóch plazmidów zawierających komplementarny DNA Bcl-xL lub Bcl-xS (stosunek molowy 1: 1) zastosowano jako kontrolę pozytywną (M). Epo oznacza erytropoetynę.
Istnieją dwa rodzaje ludzkich Bcl-x, Bcl-xL i Bcl-xS.7 Ponieważ przeciwciała anty-Bcl-x, których używaliśmy, nie mogą odróżnić dwóch gatunków, użyliśmy RT-PCR do określenia, czy Bcl-xL lub Bcl -xS był odpowiedzialny za barwienie anty-Bcl-x w komórkach erytroidalnych. Reprezentatywne doświadczenie pokazano na rycinie 4. U wszystkich zdrowych osób i pacjentów z czerwienicą prawdziwą Bcl-xL był dominującą postacią Bcl-x w prognostycznych komórkach tworzących kolonie.
Ekspresja Bcl-x przez komórki dodatnie . glikoporfiny w szpiku kostnym
Figura 5. Figura 5. Średni (. SD) procent komórek pozytywnych wobec glikoforyny wykazujących ekspresję Bcl-x w szpiku kostnym pacjentów z czerwienicą prawdziwą (PV), wtórną erytrocytozą (SE), nadpłytkowością samoistną (ET) lub przewlekłą białaczką szpikową (CML) i obiekty kontrolne. Wyniki uzyskano za pomocą cytometrii przepływowej.
Biorąc pod uwagę, że komórki w niezależnych od erytropoetyny stadiach różnicowania erytroidalnego wyrażają Bcl-x u pacjentów z czerwienicą prawdziwą, postawiliśmy hipotezę, że liczba komórek pozytywnych wobec glikoforyny A w szpiku kostnym, które eksprymują Bcl-x będzie wyższa u pacjentów z czerwienicą prawdziwą niż u zdrowych ochotników lub pacjentów z innymi zaburzeniami mieloproliferacyjnymi lub wtórną erytrocytozą. Testowaliśmy tę koncepcję, określając procent komórek jednojądrzastych, które były pozytywne zarówno dla glikoforyny A, jak i Bcl-x w szpiku kostnym od 8 dawców szpiku, 14 pacjentów z czerwienicą prawdziwą, 12 z wtórną erytrocytozą, 9 z niezbędną nadpłytkowością i 10 z Przewlekła białaczka szpikowa. Odsetek komórek erytroidalnych i stosunek niedojrzałych komórek (proerytroblastów i erytroblastów zasadochłonnych) do komórek dojrzałych (erychroblastów polichromatycznych i ortochromatycznych) były podobne u osób kontrolnych iu pacjentów. Jednak odsetek komórek, które były pozytywne zarówno dla glikoforyny A, jak i Bcl-x był istotnie wyższy (P <0,001 na podstawie jednokierunkowej analizy wariancji) u pacjentów z czerwienicą prawdziwą (21,8 . 3,6%) niż u pacjentów z erytrocytozę (6,87 . 1,95%), pacjenci z nadpłytkowością samoistną (3,81 . 0,97%), pacjenci z przewlekłą białaczką szpikową (2,7 . 0,41%) oraz normalną grupą kontrolną (6,62 . 1,58%) (ryc. 5) [hasła pokrewne: suprasorb, Enterolcitalopram, hurtownia portfeli ] [hasła pokrewne: turkuć podjadek ciekawostki, wodniak powrózka nasiennego, urobilinogen w moczu norma ]