Ekspresja Bcl-x w prekursorach erytroidalnych od pacjentów z czerwienicą prawdziwą czesc 4

W przeciwieństwie do tego, obecność lub brak erytropoetyny nie miały znaczącego wpływu na ekspresję Bcl-x w populacji A dodatniej pod względem glikoforyny komórek od pacjentów z czerwienicą prawdziwą (wartości, 87,8 procent z erytropoetyną i 75,2 procent bez erytropoetyny) (Figura 1). ). Figura 2. Figura 2. Analiza morfologiczna (panel A) i analiza immunocytochemiczna (panel B) ekspresji Bcl-x w komórkach erytroidalnych od pacjentów z czerwienicą prawdziwą (PV) i podmiotami kontrolnymi. Komórki wybarwiono roztworem May-Grunwald-Giemsa (Panel A) i analizowano immunocytochemicznie pod kątem ekspresji Bcl-x (Panel B) (x 1000). Istnieją komórki apoptotyczne w preparacie kontrolnym bez erytropoetyny, a ekspresja Bcl-x wzrasta wraz z dojrzewaniem komórek erytroidalnych u pacjentów z czerwienicą prawdziwą przy braku erytropoetyny. Nie wykryto sygnału, gdy komórki inkubowano z normalną surowicą króliczą zamiast króliczego anty-Bcl-x. Wszystkie próbki pochodzą z reprezentatywnego doświadczenia przeprowadzonego w trzech powtórzeniach.
Wyniki te zostały potwierdzone analizą immunocytochemiczną. Figura 2A i Figura 2B przedstawiają reprezentatywny eksperyment. W obecności erytropoetyny Bcl-x był eksprymowany głównie w niedojrzałych komórkach erytroidalnych zarówno od osób kontrolnych, jak i pacjentów z czerwienicą prawdziwą. Jednakże, gdy kolonie erytroidów hodowano bez erytropoetyny przez 24 godziny, kontrolne komórki progenitorowe erytroidów poddano apoptozie, co oceniono morfologicznie (Figura 2A i Figura 2B) i na podstawie typowego wzorca fragmentacji DNA w apoptozie (nie pokazano). Zmianom tym towarzyszyła zmniejszona ekspresja Bcl-x (ryc. 2A i ryc. 2B). W przeciwieństwie do tego, u pacjentów z czerwienicą prawdziwą, progesteron erytroidów hodowanych bez erytropoetyny przez 24 godziny nie wykazywał żadnych dowodów apoptozy (Figura 2A i Figura 2B), a ekspresja Bcl-x utrzymywała się w niedojrzałych erytroblastach i była nawet zwiększona w bardziej dojrzałe komórki (Figura 2A i Figura 2B). Co ciekawe, odsetek dojrzałych erytroblastów był większy, gdy prekursory erytrocytów czerwienicy prawdziwej były hodowane bez erytropoetyny, niż gdy były hodowane z erytropoetyną (średnia [. SD], 54 . 6 procent vs. 29 . 8 procent), co sugeruje, że brak erytropoetyny ułatwia dojrzewanie erytroidalnych komórek progenitorowych u pacjentów z czerwienicą prawdziwą.
Figura 3. Figura 3. Ekspresja Bcl-x w komórkach erytroidalnych od pacjentów z czerwienicą prawdziwą (PV) i osobami kontrolnymi hodowanymi w nieobecności erytropoetyny. Komórki erytroidów analizowano za pomocą cytometrii przepływowej z anty-glikoforyną A i anty-Bcl-x (panel A), wybarwiono roztworem May-Grunwald-Giemsa do analizy morfologicznej (panel B) i analizowano immunocytochemicznie pod kątem ekspresji Bcl-x ( Panel C) (× 1000). Nie ma kolonii erytroidalnych w normalnych kontrolach w tych warunkach hodowli. Wartości powyżej i poniżej poziomych linii na panelu A wskazują procent komórek dodatnich zarówno dla glikoforyny A i Bcl-x, jak i procent dodatni dla glikoforyny A i ujemny dla Bcl-x, odpowiednio. Wszystkie wyniki pochodzą z reprezentatywnego doświadczenia przeprowadzonego w trzech powtórzeniach.
Aby dalej przetestować, czy ekspresja Bcl-x była niezależna od erytropoetyny w progenitorach erytroidalnych od pacjentów z czerwienicą prawdziwą, komórki jednojądrowe od pacjentów z czerwienicą prawdziwą i normalnymi osobnikami wysiewano równolegle w hodowlach metylocelulozy pod nieobecność erytropoetyny
[przypisy: amiodaron, disulfiram, sklerodermia ]
[przypisy: aktualne występowanie grzybów, ból pod lewą łopatką przyczyny, olej rydzowy właściwości ]