fotokoagulacja laserowa siatkówki warszawa

Ponadto, stwierdziliśmy, że szybkość rozpadu R1623Q INa jest przyśpieszona w znacznie większym zakresie niż typ dziki przy pomiarze w zapisach z całych komórek z komórek jajowych lub HEK (Figury i 2) lub z uśrednionych dla zespołu prądów jednostkowych (fig. 6). Ta zwiększona wrażliwość na leki mogłaby powstać, gdyby mutacja zwiększyła powinowactwo stanu otwartego dla lidokainy, lub alternatywnie mechanizm inaktywacji stanu otwartego mógłby być wrażliwy na lidokainę (22). Figura 2b pokazuje, że wpływ lidokainy na szybkość zaniku R1623Q INa był w dużej mierze niezależny od napięcia od a30 do +20 mV, podczas gdy szybkość inaktywacji w stanie otwartym na kanale Na wzrasta zasadniczo w tym zakresie potencjału błony (32, 34). . Ponadto, Figura 5 wskazuje, że wysokie stężenie lidokainy (200 .M), które znacznie przyspieszyło rozpad INa i zmniejszyło liczbę otworów na przeciągnięcie, nie miało wpływu na średni czas otwarcia. Podsumowując, odkrycia te sugerują, że zwiększona wrażliwość lidokainy R1623Q nie jest związana ze wzrostem bloku w stanie otwartym ani ze zwiększoną szybkością inaktywacji w stanie otwartym. Ponieważ lidokaina nie wydaje się wpływać na inaktywację ze stanów otwartych, rozważaliśmy możliwość, że zwiększona inaktywacja w stanie zamkniętym może leżeć u podstaw zwiększonej wrażliwości na lek u mutanta. Na poparcie tego poglądu, nasze wyniki wyjaśniają, że zmutowane kanały utrzymywane w potencjałach błonowych w pobliżu Vrest są bardziej podatne na inaktywację w stanie zamkniętym (Figura 3a), a kanały R1623Q wystawione na działanie lidokainy przy tych potencjałach błony są bardziej podatne na blokowanie niż typu dzikiego. (Figura 3b). Podczas depolaryzacji wystarczającej do otwarcia kanałów, część kanałów dezaktywuje się bezpośrednio ze stanów zamkniętych bez otwierania (35, 36). Jeśli blok lidokainy zostanie w jakiś sposób wzmocniony przez inaktywację w stanie zamkniętym, wówczas wzmocniony blok lidokainy mutanta R1623Q może szybko rozwinąć się podczas depolaryzacji. Czy interakcja między lidokainą a dezaktywacją w stanie zamkniętym po depolaryzacji może wyjaśnić wzmocniony blok szczytowego prądu R1623Q, jak również indukowane przez lek przyspieszenie rozpadu INa. Ponieważ zamknięte, inaktywowane i stany związane z lekiem są nieprzewodzące, wzajemna zależność pomiędzy dezaktywacją w stanie zamkniętym i wiązaniem leku przy potencjałach błony wystarczającej do otwarcia kanału jest trudna do oceny bezpośrednio. W związku z tym, aby zbadać wykonalność tego mechanizmu, przeprowadziliśmy symulacje ilościowe z wykorzystaniem uproszczonego schematu bramkowania kanału Na (rysunek 7a), który podsumowuje ogólną cechę współczesnych modeli bramkowania kanału na kanale Na (37): kanały mogą otwierać się przed inaktywacją lub mogą dezaktywować bezpośrednio ze stanu zamkniętego. Fenotyp R1623Q wolny od leku został zasymulowany przez zmniejszenie szybkości dezaktywacji w stanie otwartym, jak opisano wcześniej (22), a także zwiększenie szybkości inaktywacji w stanie zamkniętym (figura 7). Najpierw ocenialiśmy, czy wiązanie się leku z samym inaktywowanym stanem (bez względu na ścieżkę do inaktywacji) mogłoby równoczesne oddziaływać na działanie lidokainy na szczyt rozpadu INa i INa w R1623Q (Figura 7a, model I). Pomimo szybkiego wiązania o wysokim powinowactwie do stanu inaktywacji (Kd = 4 (3 M, przy szybkości wiązania leku było ograniczone przez dyfuzję przy 108 s <1M a 1), 20. M lidokainy miało nieznaczny wpływ na prąd (Figura 7b) , podobnie jak 200. M (nie pokazano). Nieoczekiwanie, dodanie wiązania (LMM) lidokainy o niskim powinowactwie (tj. Bloku tonikowego) do zamkniętego, nieinaktywowanego kanału (Figura 7a, model II) zasadniczo zmieniło odpowiedź modelu na niskie stężenia (a | M) leku (Figura 7b). ). Biorąc pod uwagę założenie, że powinowactwo inaktywowanego kanału do lidokainy przewyższa powinowactwo kanału zamkniętego i zakładając, że zamknięte kanały związane z lekiem dezaktywują się, mikroskopijne ograniczenia odwracalności wskazują, że prawdopodobieństwo inaktywacji w stanie zamkniętym jest zwiększone przez wiązanie leku (zobacz legendę). 7 dla wyraźnego sformułowania) [hasła pokrewne: urobilinogen w moczu norma, złamanie collesa, serwatka z mleka owczego ]