Startery specyficzne dla genu dla mRNA 24-hydroksylazy (nr dostępu w GenBank L13286) stanowiły 5 (3-ATT ACC TGA GAA TCA GAG GCC ACG-3. (sens) i 5 (3-GCC AAA TGC AGT TTA AGC TCT GCT-3. (antysensowny). Startery specyficzne dla genu dla mRNA RANK (numer dostępu w GenBank AF018253) to 5a-GTC TGC CCT GTG GCC CGG ATG AA-3. (sens) i 5. -GCA AAC GCC AAA GAT GAT GGC AG-3. (antysensowny). Warunki amplifikacji były następujące: 5-minutowy etap inicjacji w 94 ° C; 35 cykli w 94 ° C przez minutę, 55 ° C przez minutę i 72 ° C przez minutę; i na koniec etap wydłużania w 72 ° C przez 7 minut. Wstępne eksperymenty wykazały, że te stany występowały podczas liniowej fazy reakcji PCR. Produkty PCR rozdzielono za pomocą 2% elektroforezy w żelu agarozowym i ujawniono je przy barwieniu bromkiem etydyny w świetle ultrafioletowym. Względne ilości eksprymowanego mRNA RANK określono przez densytometrię i porównano z poziomami ekspresji mRNA p-aktyny. Test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej. Ekstrakty jądrowe otrzymano z komórek pochodzących z CFU-GM (106), jak opisali Dignam i współpracownicy (15). Sekwencja oligonukleotydu wiążącego NF-pBs stosowanego jako sonda radioaktywnego DNA to 5a-AAG TGA GGG GAC TTT CCC AGG-3 .. Reakcję wiązania DNA przeprowadzono w temperaturze pokojowej w objętości 15 ul, która zawierała bufor wiążący (10 mM Tris-HCl przy pH 7,5, 0,5 mM EDTA, mM MgCl2, 4% glicerolu, 50 mM NaCl i 0,5 mM DTT), 50 (ig / ml poli (dl-dC), sonda znakowana 32P / s białka 105 cpm i 8 (ig białek jądrowych w obecności lub nieobecności 50-krotnej nadmiaru niewyznakowanej sondy. Po inkubacji przez 20 minut próbki poddawano elektroforezie na natywnych 6% akrylamidowych żelach 10 mM Tris-glicyna (pH 8,6). Żele wysuszono i wystawiono na promieniowanie rentgenowskie przez noc. Statystyka. Wydajność transdukcji określono przez obliczenie stosunku liczby kolonii CFU-GM, które powstały w obecności G418 do liczby, która powstała w nieobecności G418. Wyniki transdukcji i oznaczeń hodowli podano jako średnie. SD. Istotność oceniano stosując dwustronny, niesparowany test Studenta, przy czym P <0,05 uznano za znaczący. Eksperymenty z użyciem komórek szpiku kostnego od 10 z 10 osobnych dawców zdrowych szpiku wykazały podobny wzór wyników. Wyniki Transdukcja prekursorów OCL. Dwa dni po transdukcji genu MVNP do ludzkich komórek szpiku kostnego, ekspresję genu MVNP oceniano przez immunobarwienie; 10-15% komórek reagowało krzyżowo z przeciwciałem monoklonalnym anty-MVNP (Figura 1a). Komórki następnie hodowano do CFU-GM, najwcześniejszego identyfikowalnego prekursora OCL, z lub bez G418 (500 .g / ml). Wydajność transdukcji oceniona w 7 dniu tworzenia kolonii CFU-GM wynosiła w przybliżeniu 20% (Figura 1b). Prawie wszystkie nietransdukowane komórki zostały zabite przez traktowanie hodowli 500 .g / ml G418 (Figura 1b). Analiza Western blot potwierdziła, że transdukowane komórki wyrażały odpowiednie białko MV (Figura 1c). Figura 1: Transdukcja prekursorów OCL. (a) Immunologiczne barwienie ludzkich komórek szpiku kostnego w celu ekspresji MV. Dwa dni po transdukcji genów MVNP i MVM do ludzkich komórek szpiku kostnego, ekspresję genu oceniano przez immunobarwienie z użyciem przeciwciał monoklonalnych anty-MVNP i anty-MVM. Ciemne zabarwienie oznacza pozytywną reaktywność. Podobny wzór immunobarwienia wykryto w 3 oddzielnych eksperymentach. (b) tworzenie kolonii CFU-GM z transdukowanych normalnych ludzkich komórek szpiku kostnego. Komórki hodowano dla CFU-GM, najwcześniejszego identyfikowalnego prekursora OCL, z lub bez G418 (500 .g / ml). Wydajność transdukcji oceniano przez zliczenie rozwiniętego CFU-GM w dniu 7. Wyniki reprezentują wyniki z typowego eksperymentu. * P <0,05 w porównaniu z nietransdukowanymi komórkami; ** P <0,01 w porównaniu z nietransdukowanymi komórkami hodowanymi z 500 .g / ml G418 [więcej w: serwatka z mleka owczego, ból pod lewą łopatką przyczyny, żółty stolec ]
Random entries
zwyrodnienie plamki żółtej leczenie warszawa
Klony cDNA MVNP i MVM były hojnymi prezentami od Chris Richardson, University of Toronto, Toronto, Kanada. Fragment cDNA MVNP o długości 1,6 kb wycięto z plazmidu pETL-NP # 30 przez… Read More zwyrodnienie plamki żółtej leczenie warszawa
Upośledzona ekspresja receptora trombopoetyny przez płytki krwi od pacjentów z czerwienicą prawdziwą ad 6
DevURLAnaliza densytometryczna ekspresji Mpl przez płytki krwi od 10 pacjentów z czerwienią prawdziwą i 2 pacjentów z idiopatyczną zwłóknieniem szpiku. Nieprawidłowości, które znaleźliśmy w fosforylacji tyrozyny białek płytek krwi u… Read More Upośledzona ekspresja receptora trombopoetyny przez płytki krwi od pacjentów z czerwienicą prawdziwą ad 6
Tags
acetylowany adypinian diskrobiowy
aktualne wystepowanie grzybow
aktualne występowanie grzybów
alfa pvp skutki uboczne
artefakty ruchowe
ashwagandha skutki uboczne
babka płesznik dawkowanie
baclofen alkoholizm
badanie trus
badanie żywej kropli krwi wrocław
ból pod lewą łopatką przyczyny
kątnica jelita grubego
olej rydzowy właściwości
serwatka z mleka owczego
turkuć podjadek ciekawostki
urobilinogen
urobilinogen w moczu norma
wodniak powrózka nasiennego
występowanie grzybów
złamanie collesa
żółty stolec