psycholog dziecięcy bydgoszcz fordon

Jak wiąże się z IL-2R. łańcuch, a Jak3 kojarzy się z IL-2R. łańcuch; oba stają się fosforylowane tyrozyną po aktywacji receptora (27). Brak zmiany w fosforylacji Jak1 lub asocjacji Jak3 z IL-2R. łańcuch obserwowano w komórkach traktowanych peptydem (dane nie pokazane). Członkowie rodziny kinaz Src, Lck i Fyn, wiążą się z IL-2R. łańcuch (28, 29) i ulegają fosforylacji po aktywacji receptora (30). Fosforylacja tych kinaz może prowadzić do rekrutacji innych białek zaangażowanych w przekazywanie sygnałów, w tym kinazy PI3 (31, 32). Leczenie peptydem nie zmieniało ilości fosforylowanej fosforylowanej na Fyn lub Lck immunoprecypitowanej z aktywowanych komórek (Figura 2b) lub ich aktywności kinazowej (Figura 2c). Dlatego leczenie DQ 65-79 nie hamuje ogólnie aktywności fosfotyrozyny, ani nie wpływa na aktywność kilku proksymalnych kinaz tyrozynowych. DQ 65-79 blokuje aktywność kinazy p70 S6. Wykazaliśmy, że DQ 65-79 blokuje zdarzenia, które są krytyczne dla progresji cyklu komórkowego, z najbardziej proksymalnym zdarzeniem zidentyfikowanym jako obniżenie poziomu p27 (15). Rapamycyna hamuje również degradację p27 (14) i innych dystalnych cząsteczek sygnałowych, w tym kinazy p70 S6 (33, 34). Ta kinaza jest ważna, ale nie niezbędna, do wywoływania odpowiedzi proliferacyjnej; komórki pozbawione genu kinazy S6 p70 nadal ulegają proliferacji, ale wolniej (35). Ta kinaza fosforyluje białko rybosomalne S6, co prowadzi do wzrostu translacji mRNA rybosomu i czynnika wydłużającego (36). Rapamycyna pośrednio hamuje aktywność kinazy p70 S6 poprzez blokowanie funkcji górnego mTOR, która bezpośrednio fosforyluje kinazę p70 S6 (37). Komórki traktowane DQ 65-79 lub rapamycyną wykazują zaburzoną aktywność kinazy p70 S6 (Figura 3). Peptyd lub rapamycyna dodana bezpośrednio do testu kinazy nie przyniosły efektu (dane nie pokazane). Zatem inne odległe zdarzenie w sygnalizacji receptora IL-2 jest blokowane zarówno przez DQ 65-79 i rapamycynę. Figura 3DQ 65-79 blokuje aktywność kinazy p70 S6. Komórki stymulowano IL-2 w obecności wskazanych środków przez 15 minut i oznaczono aktywność kinazy p70 S6. Western blot kinazy p70 S6 przedstawiono poniżej oznaczenia kinazy. W przeciwieństwie do rapamycyny, DQ 65-79 hamuje aktywność kinazy Akt. Akt, znana również jako kinaza białkowa B, jest kinazą serynowo-treoninową w szlaku IL-2R, która nie jest hamowana przez rapamycynę. Akt bierze udział w proliferacji (38, 39), zapobieganiu apoptozie (39, 40) i transdukcji sygnału insuliny (41. 43). Metabolit grzybowy wortmanina działa przed Akt, kowalencyjnie wiążąc się z katalityczną podjednostką p110 kinazy PI3, blokując jej aktywność kinazową (44). Aktywność kinazy Akt hamowano przez traktowanie komórek DQ 65-79 lub wortmaninem, ale nie rapamycyną (Figura 4). Ten efekt był pośredni. peptyd dodany do testu kinazy nie miał działania (dane nie pokazane). Zatem DQ 65-79 różni się od rapamycyny przez blokowanie sygnalizacji IL-2R w pobliżu Akt. Figura 4DQ 65-79 hamuje aktywność kinazy Akt. Komórki stymulowano IL-2 w obecności wskazanych środków przez 15 minut i oznaczono aktywność kinazy Akt. Western blot Akt pokazano poniżej testu kinazy. W, wortmannina. DQ 65-79 blokuje aktywność kinazy PI3 in vitro. Intrygująco, reszty 70. 79 DQ 65-79 są wysoce homologiczne do regionu katalitycznej podjednostki kinazy PI3 (Tabela 1), co skłania nas do zbadania wpływu DQ 65-79 na aktywność kinazy PI3. PI3-kinaza składa się z podjednostki regulacyjnej i katalitycznej, i istnieje kilka izoform każdej podjednostki (45). Podjednostka regulatorowa (p85) wiąże się z IL-2R po stymulacji, bezpośrednio lub pośrednio, przez wiązanie z resztami fosfotyrozyny (46)
[przypisy: urobilinogen w moczu norma, ashwagandha skutki uboczne, badanie żywej kropli krwi wrocław ]