rudziński kardiolog kraków

Nie ustalono jeszcze bezpośredniego związku między fosforylacją p47phox a procesem primingu. Receptor GM-CSF składa się z 2 łańcuchów, oznaczonych. i . (32, 33). Zaangażowanie GM-CSF z jego receptorem aktywuje szereg szlaków przekazywania sygnałów w ludzkich neutrofilach, w tym białkową kinazę tyrozynową, PI3K (34. 36) i członków rodziny MAPK ERK1 / 2 (37. 40). Wiązanie GM-CSF z jego receptorem indukuje i zwiększa wiązanie białkowej kinazy tyrozynowej JAK2 i kinaz tyrozyny src-tyrozynowej do wewnątrzkomórkowej domeny receptora (34, 41, 42). Te kinazy tyrozynowe przekazują sygnał GM-CSF przez fosforylację innych białek, takich jak STAT, PKB i PI3K. TNF-. wywiera działanie komórkowe wiążąc się z 2 receptorami, p55 i p75. Neutrofile eksprymują oba typy receptorów (43), które są połączone z różnymi szlakami sygnałowymi, takimi jak p38 MAPK (27, 39). Mechanizmy molekularne, dzięki którym GM-CSF i TNF-a w pierwszej kolejności oddech oddechowy w ludzkich neutrofilach nie jest w pełni znany. RA jest ogólnoustrojowym zaburzeniem zapalnym najczęściej atakującym stawy. Patofizjologia RA obejmuje rozregulowaną produkcję cytokin i gromadzenie neutrofili w płynie maziowym (44). Zarówno nadmierne wytwarzanie ROS, jak i uwalnianie enzymów degradujących przez neutrofile są związane z uszkodzeniem tkanki reumatoidalnej (4, 45). Celem tego badania było zidentyfikowanie miejsca p47phox, które jest fosforylowane podczas TNF-a. i indukowane przez GM-CSF. indukowanie wybuchu oksydacyjnego; do określania kinazy białkowej zaangażowanej w ten proces; oraz w celu ustalenia, czy te zdarzenia fosforylacji występują podczas choroby zapalnej. Użyliśmy tandemowej spektrometrii masowej (MS / MS) do wykazania, że cel fosforylacji na p47phox po GM-CSF i TNF-a ekspozycja jest Ser345. Pokazaliśmy także, że ERK1 / 2 są kinazami białkowymi zaangażowanymi w fosforylację Ser345 indukowaną przez GM-CSFa, podczas gdy p38 MAPK kontroluje fosforylację tego samego miejsca indukowaną TNF-a. Ponadto szlaki fosforylacji były aktywowane w neutrofilach izolowanych z płynu maziowego u pacjentów z RA. Pokazaliśmy również, że fosforylacja Ser345 na p47phox jest bezpośrednio związana z GM-CSF. i TNF-y indukował priming produkcji ROS. Wyniki te pokazują, że Ser345 jest punktem konwergencji wykorzystywanym przez różne działania MAPK do wywoływania gruntowania produkcji ROS. Selektywna fosforylacja Ser345 na p47phox jest według naszej wiedzy nowym mechanizmem wywoływania i może służyć jako nowy cel przeciwzapalny. Wyniki Identyfikacja GM-CSF. i miejsce docelowe fosforylacji p47phox indukowane przez TNF-a. W formylo-metionylo-leucylo-fenyloalaninie. (fMLP-) lub stymulowane PMA ludzkie neutrofile, p47phox jest fosforylowany na kilku serynach zlokalizowanych pomiędzy Ser303 i Ser379 (17, 18). Natomiast w GM-CSF. lub aktywowane TNF-. ludzkie neutrofile, p47phox jest częściowo ufosforylowany na wspólnym peptydzie, który może zawierać kilka seryn jako potencjalne cele GM-CSF. i TNF-a kaskady zalewania (29, 30). W celu zidentyfikowania miejsca (-ów) p19phox, które są fosforylowane po GM-CSF lub TNF-a narażenie, czy oczyszczone immunologicznie p47phox z GM-CSF. i traktowane TNF-y komórki (5 x 108) i analizowano je za pomocą spektrometrii mas. Białko strawiono trypsyną i endoproteinazą Lys-C, a powstałe mieszaniny peptydów analizowano za pomocą chromatografii cieczowej – jonizacji przez elektrorozpylanie – MS / MS z pozyskiwaniem zależnym od danych. Fosfopeptyd (aminokwasy 338. 354) wykryto po 26 minutach i automatycznie wybrano do sekwencjonowania za pomocą MS / MS (Figura 1). (Ten sam wynik uzyskano dla GM-CSF i TNF-a, ale pokazano tu jedynie wynik GM-CSF)
[patrz też: babka płesznik dawkowanie, żółty stolec, acetylowany adypinian diskrobiowy ]