Specyficzna fosforylowana przez p47phoxseria przez zbieżne MAPK pośredniczy w primingu oksydazy neutrofilowej NADPH w miejscach zapalnych

Neutrofilowa oksydaza NADPH odgrywa kluczową rolę w obronie gospodarza i w stanach zapalnych poprzez uwalnianie dużych ilości ponadtlenku i innych ROS. Prozapalne cytokiny, takie jak GM-CSF i TNF-a prime produkcja ROS przez neutrofile poprzez nieznane mechanizmy. Tutaj wykorzystaliśmy sekwencjonowanie peptydów za pomocą tandemowej spektrometrii masowej, aby pokazać, że GM-CSF i TNF-a indukują fosforylację Ser345 na p47phox, cytosolowy składnik oksydazy NADPH, w ludzkich neutrofilach. Ponieważ Ser345 znajduje się w sekwencji konsensusowej MAPK, przetestowaliśmy działanie inhibitorów MAPK. Inhibitory szlaku ERK1 / 2 znosiły indukowaną przez GM-CSFa fosforylację Ser345, podczas gdy inhibitor p38 MAPK znosił indukowaną przez TNF-a fosforylację Ser345. Transfekcja komórek HL-60 zmutowanym p47phox (S345A) zahamowała GM-CSF. i TNF-y indukował priming produkcji ROS. To zdarzenie było również hamowane w neutrofilach przez przepuszczalny dla komórek peptyd zawierający sekwencję TAT-p47phox-Ser345. Ponadto, wytwarzanie ROS, fosforylacja p47phox-Ser345 i fosforylacja ERK1 / 2 i p38 MAPK była zwiększona w neutrofilach błony maziowej u pacjentów z reumatoidalnym zapaleniem stawów (RA), a peptyd TAT-Ser345 hamował wytwarzanie ROS przez te zagruntowane neutrofile. To badanie zatem identyfikuje zbieżne szlaki MAPK na Ser345, które są zaangażowane w GM-CSF. i TNF-a indukowało wywoływanie neutrofilów i są aktywowane w RA. Hamowanie punktu zbieżności tych szlaków może służyć jako nowa strategia przeciwzapalna. Wprowadzenie Neutrofile odgrywają kluczową rolę w obronie gospodarza przed inwazyjnymi mikroorganizmami i odgrywają główną rolę w zapaleniu (1. 4). W odpowiedzi na różne czynniki, uwalniają duże ilości anionu ponadtlenkowego (O2.) I inne ROS w zjawisku znanym jako wybuch oddechowy (4). Produkcja neutrofili z O2. jest zależny od aktywacji oksydazy NADPH, wieloskładnikowego układu enzymatycznego, który katalizuje zależną od NADPH redukcję tlenu do O2. (5. 7). W komórkach spoczynkowych oksydaza NADPH jest nieaktywna, a jej składniki są rozmieszczone między cytozolem i błonami. Gdy komórki są aktywowane, składniki cytozolowe oksydazy fagocytarnej (phox), takie jak p47phox, p67phox, p40phox i Rac2, migrują do błon, gdzie wiążą się ze składnikiem związanym z błoną (flawocytochromem b558), aby złożyć katalitycznie aktywny oksydaza (8. 11). Po aktywacji oksydazy NADPH p47phox, p67phox, p40phox i p22phox zostają fosforylowane (12-16). Fosforylacja p47phox na kilku serynach odgrywa kluczową rolę w aktywacji oksydazy w nienaruszonych komórkach (17. 19). Ponieważ utleniacze wytwarzane przez oksydazę NADPH są wysoce toksyczne nie tylko dla czynników zakaźnych, ale także dla sąsiadujących tkanek gospodarza, ścisła regulacja kompleksu enzymów jest konieczna do kontrolowania ich wytwarzania. Fosforylacja / defosforylacja podjednostek oksydazy jest jednym z takich mechanizmów regulacyjnych. Wykazano, że różne kinazy fosforylują p47phox in vitro, ale ścieżki regulatorowe zaangażowane w etapy primingu i aktywacji in vivo są niejasne. Neutrofil O2 produkcja może być wzmocniona przez wcześniejsze narażenie na działanie. środki takie jak prozapalne cytokiny GM-CSF, TNF-a i IL-8 (20, 21). Te cytokiny z natury indukują bardzo słabą odpowiedź oksydacyjną przez neutrofile, ale silnie zwiększają uwalnianie ROS przez neutrofile po ekspozycji na bodziec stosowany wtórnie, taki jak bakteryjne peptydy N-formylowe (22, 23). Intymne mechanizmy zaangażowane w proces zalewania są słabo poznane. Niektóre badania sugerują, że prymowanie jest regulowane na poziomie receptora i heterotrimerycznego białka G (24, 25) lub poprzez wzrost ekspresji cytochromu b558 (26. 28). My i inni donieśliśmy o tym, że zaszczepienie ludzkiego oddechu neutrofilowego przez GM-CSF, LPS i TNF-a jest związane z częściową fosforylacją cytosolicowego komponentu oksydazy NADPH p47phox (26, 29. 31), ale tożsamość fosforylowanych seryn i kinaz zaangażowanych w ich fosforylację pozostała do odkrycia
[hasła pokrewne: aktualne wystepowanie grzybow, babka płesznik dawkowanie, urobilinogen w moczu norma ]