szpital gliwice wielospecjalistyczny

Pokazano, że kinaza PI3 jest bezpośrednio związana z IL-2R. łańcuch (46), Fyn (31), Lck (32), IRS (47) i Grb2 (48). To połączenie przenosi podjednostkę katalityczną (p110) proksymalnie do jej substratów lipidowych (49). DQ 65-79 nie wpłynęło ani na powiązanie z podjednostkami, ani na interakcję podjednostki regulacyjnej z białkami fosfotyrozyny (Figura 5). Figura 5DQ 65-79 nie wpływa na asocjację podjednostek p85 i p100 kinazy PI3 lub asocjację p85 z fosforylowanymi białkami tyrozyny. (a) P110-. podjednostkę kinazy PI3 poddano immunoprecypitacji z komórek traktowanych peptydem stymulowanych IL-2, a blot sondowano mAb swoistym dla p85. (b) mAb przeciw fosfotyrozynie zastosowano do immunoprecypitacji komórek traktowanych peptydem stymulowanych IL-2. Blot sondowano mAb anty-p85. Tabela 1DQ 65-79 jest homologiczna do podjednostki p110 kinazy PI-3 Ponieważ DQ 65-79 nie zmienił interakcji fizycznych kinazy PI3, następnie testowaliśmy wpływ peptydu na aktywność kinazy PI3. Test kinazy lipidowej przeprowadzono z immunoprecypitacją kinazy PI3 z komórek traktowanych peptydem. Podczas gdy wortmanina blokowała aktywność kinazy PI3, nie wykryto efektu w przypadku DQ 65-79 (Figura 6a). Jednakże działanie peptydu może nie być widoczne, jeśli peptyd nie wiąże się bezpośrednio z kinazą. Region homologii z podjednostką p110 znajduje się w katalitycznej części cząsteczki, a nie w regionie związania podjednostki (50), a peptyd nie ma wpływu na asocjację podjednostek. Aktywność kinazy PI3 była zablokowana, gdy DQ 65-79 dodano bezpośrednio do testu kinazy (Figura 6b). Zatem DQ 65-79 blokuje aktywność katalityczną kinazy PI3 in vitro w sposób odmienny od wortmaniny. Figura 6DQ 65-79 hamuje aktywność kinazy PI3 tylko wtedy, gdy jest dodana bezpośrednio do testu kinazy lipidowej in vitro. (a) Komórki stymulowano IL-2 w obecności wskazanych środków przez 15 minut i przeprowadzono test kinazy lipidowej PI3-kinazy. (b) PI3-kinaza była immunoprecypitowana z komórek T aktywowanych IL-2 (3 i DQ 65-79 (40 | _M, 4 | _M i 0,4 | _M), DQ 65-79 (72D) (40 | jM) rapamycynę (100 nM) lub wortmaninę (100 nM) dodano bezpośrednio do testu kinazy lipidowej. DQ 65-79 przenika przez błonę komórkową. Te odkrycia sugerują, że DQ 65-79 nie wywierał efektów przez przekazywanie sygnału przez receptor związany z błoną, ale raczej przez bezpośrednie hamowanie kinazy PI3. W związku z tym zapytaliśmy, czy DQ 65-79 wchodzi do komórek w celu interakcji z kinazą PI3. Analog z DQ 65-79 zsyntetyzowano za pomocą znacznika RYIRS na jego końcu karboksylowym (DQ 65-79 . IRS). Ten związek był nie do odróżnienia od nieznakowanego peptydu w testach proliferacji limfocytów T (dane nie pokazane). Linię komórkową limfocytów T cytolitycznych traktowano DQ 65-79 (IRS, permeabilizowano i barwiono zarówno mAb anty-IRS (IgG1), jak i mAb anty-HLA klasy I (IgG2a). W celu oceny lokalizacji peptydów i cząsteczek HLA klasy I za pomocą mikroskopu konfokalnego wykorzystano specyficzne izotypowo drugorzędowe i trzeciorzędowe przeciwciała skoniugowane z różnymi związkami fluorescencyjnymi (Figura 7). Barwienie anty-HLA klasy I było w dużej mierze ograniczone do błony komórkowej, pojawiając się jako pierścień wokół komórek. Przeciwnie, DRS 65-79 (IRS) miały bardzo wyraźny wzór barwienia iw wielu komórkach pojawiały się w całym wnętrzu komórki. Zatem DQ 65-79 wchodzi do komórki, gdzie może się kojarzyć z kinazą PI3 i hamować jej aktywność. Figura 7 Peptyd DQ 65-79 lokalizuje się zarówno w błonie komórkowej, jak iw komórce. Mikroskopia konfokalna linii cytotoksycznych komórek T traktowanych DQ 65-79A IRS i albo mAb MHC klasy I (panele dolne) albo medium (górne panele) i przetwarzane jak opisano w Metodach. Barwienie DQ 65-79 jest czerwone; Barwienie klasy I jest zielone. Omówienie Syntetyczny peptyd odpowiadający resztom 65. 79 allelu HLA klasy II DQA * 03011 hamuje proliferację zależną od IL-2. W sposób podobny do rapamycyny.
[patrz też: acetylowany adypinian diskrobiowy, ból pod lewą łopatką przyczyny, babka płesznik dawkowanie ]