warta psychiatra

Alternatywnie, leki mogą w jakiś sposób poprawić lub naprawić. nieuporządkowana funkcja bramkowania inaktywacji (19, 20). Niedawno sporadyczna mutacja missense w obszarze wykrywania napięcia w kanale Na serca (segment S4 domeny IV; R1623Q) została zgłoszona u Japonki, która cierpiała na zespół długiego QT i która była skutecznie leczona za pomocą meksyletyny, lidokainy analog (21). Heterologiczna ekspresja ludzkich kanałów Na serca (hH1) z R1623Q ujawniła destabilizowaną inaktywację ze stanu otwartego (22, 23) zgodnie z ważną rolą czujnika ładunku IV-S4 domeny w bramkowaniu inaktywacyjnym (24, 25). Ponadto okazało się, że ten zaburzony fenotyp inaktywacji, analogicznie do innych zaburzeń LQT3, został przynajmniej częściowo skorygowany przez lidokainę (22). Tutaj informujemy, że kanał R1623Q Na jest niezwykle wrażliwy na lidokainę. Co zaskakujące, odkrywamy, że lidokaina ani nie zamyka otwartego kanału, ani nie naprawia inaktywacji otwartych kanałów, jak proponowano wcześniej (22). Nasze wyniki wskazują raczej na nieprzewidziany mechanizm działania lidokainy. Stwierdziliśmy, że lidokaina wzmacnia wewnętrzny proces inaktywacji, który jest amplifikowany w R1623Q, znany jako inaktywacja w stanie zamkniętym, a tym samym całkowicie uniemożliwia otwarcie kanału. Nasze wyniki ujawniają mechanizm molekularny dla nietypowej wrażliwości lidokainy tego konkretnego mutanta, jednocześnie sugerując inaktywację w stanie zamkniętym jako ważny funkcjonalny cel terapeutyczny dla środków blokujących kanał Na w innych długich zaburzeniach QT. Metody: ukierunkowana mutageneza reszty R1623 w kanale hH1 Na. podjednostkę przeprowadzono przy użyciu standardowych metod (26) i zweryfikowano sekwencyjnie. W celu uzyskania ekspresji w oocytach Xenopus, cRNA podjednostki a zostały wspólnie wstrzyknięte z równomolowym stosunkiem cRNA podjednostki a 1, jak opisano poprzednio (22). W celu zbadania w komórkach ssaczych, cDNA podjednostki podjednostki podjednostki a typu dzikiego i R1623Q subklonowano z wektora gospodarza pSP64T do miejsca HindIII-XbaI wektora pGFPIRS w celu bicistronowej ekspresji kanału i białek reporterowych GFP (27). Stabilne linie komórkowe zostały wygenerowane przez pierwszą linearyzację plazmidów w miejscu AseI. Zlinearyzowany DNA transfekowano do komórek HEK293 (CRL-1573, American Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA) stosując Lipofectamine (Life Technologies, Rockville, Maryland, USA) zgodnie z zaleceniami producenta. Czterdzieści osiem godzin po transfekcji komórki hodowano w DMEM (CellGro; Mediatech, Washington, DC, USA) uzupełnionym 10% FBS, 2 mM Glutamax, x penicyliną-streptomycyną, 15 mM HEPES, pH 7,4 i 500. G / mL siarczanu genetycyny (G 418, Life Technologies) w 37 ° C w wilgotnym inkubatorze z 5% CO2. Po 1-2 tygodniach selekcji izolowano pojedyncze kolonie na podstawie ich poziomu fluorescencji i badano za pomocą analizy patch-clamp. Pożądane klony utrzymywano w pożywkach selekcyjnych do dalszej analizy. Prądy Na całej komórce (INa) rejestrowano z oocytów za pomocą 2-elektrodowego zacisku napięciowego, stosując roztwór ND-96 zawierający (w mM): 96 NaCl, 2 KCl, MgCl2, 5 HEPES, pH 7,6. INa zarejestrowano z komórek HEK eksprymujących albo kanały typu dzikiego albo R1623Q Na w temperaturze pokojowej, stosując konfigurację całych komórek klamry do łatek (28) (Axopatch 200B, Axon Instruments, Burlingame, California, USA). Zewnętrznymi roztworami były (w mM): 140 NaCl, 5,4 KCl, 10 glukozy, MgCl2, 0,1 CaCl2, 10 HEPES, pH 7,4. Szklane pipety zawierające (w mM): 140 KCl, MgCl2, 4 MgATP, 10 HEPES, 5 NaCI, 5 EGTA, pH 7,4; 60. 80% oporności serii (. 6 M.) Zostało skompensowane. W przypadku jednokanałowych zapisów dołączonych do komórki zastosowano roztwór do kąpieli w celu doprowadzenia potencjału błony do zera; kąpiel zawierała (w mM): 140 KCl, 10 HEPES, pH 7,4. Pipety napełniono roztworem do zapisu zawierającym (w mM): 140 NaCl, 10 HEPES, pH 7,4
[patrz też: złamanie collesa, olej rydzowy właściwości, artefakty ruchowe ]